故事背景设定在大明永乐年间，锦衣卫副指挥使李毅（应昊茗 饰）带领手下小七等人，奉命迎接西藏大喇嘛贡嘎扎西进京。然而，在途中他们遭到了神秘杀手的袭击。一场激烈的战斗之后，众人中有人丧生，李毅负伤，幸亏小七（王楚 饰）不惜拼死，才击退了对方。然而，在混乱之中，他们发现了一个令人意外的事实：车里的大喇嘛竟然是个女子。

电影《大明锦衣卫》通过讲述锦衣卫与神秘杀手的对决，以及在危机时刻的意外相遇，引发了一段跨越阶级与身份的爱情故事。李毅和小七的命运交织在一起，两人从最初的敌对逐渐走向合作与理解，最终陷入了一段充满火药味的感情中。这部电影不仅展示了武侠的刺激与冒险，还融入了浓厚的爱情元素，让观众感受到了爱情与冒险交织的独特魅力。