电影《血色湘西》带入了抗日战争的艰苦相持阶段，背景设定在湖南战场，这里成为了抗日战争正面战场的前沿。在这个战斗激烈的时刻，一位中共党员童莲（刘敏涛饰演）被派遣前往湘西，承担了一项重要任务，即运送抗战物资的地下秘密运输线。这个任务让她身处险境，但也激发了她的坚韧与勇气。

湘西雪峰山下的麻溪铺镇成为了这个故事的重要背景，这里是“竿民”世代居住的地方，平静祥和的山民生活在这里。然而，这个宁静的地方也被卷入了抗日斗争的漩涡中。在一场盛大的端午龙舟比赛中，田穗穗（白静饰演）与石三怒（李桓饰演）一见钟情，而镇长龙太爷的孙子们也喜欢上了穗穗。然而，穗穗不知道，石三怒是排帮首领麻大拐子的义子，两家世仇。

童莲护送抗战物资时遭到排帮抢劫，但幸得田大有相救。麻大拐子却认出田大有是杀害义兄石天保的仇人，派出义子石三怒半途劫杀田大有，引发了石三怒与穗穗之间的恩怨情仇。然而，民族大义使得竿民对护送物资表示支持，但排帮因世代仇恨，拒绝放行。